【佳學(xué)基因檢測(cè)】讓基因檢測(cè)結(jié)果更加正確的竅門：MLPA的應(yīng)用

MLPA代表Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification，是一種分子生物學(xué)技術(shù)，結(jié)合了引物探針依賴的PCR（Polymerase Chain Reaction）和多重探針靶向的特點(diǎn)。

MLPA的原理基于以下幾個(gè)步驟：

引物探針混合物的設(shè)計(jì)：MLPA使用兩種類型的DNA引物：探針和引導(dǎo)片段。探針包含用于特定序列的識(shí)別和連接的序列。引導(dǎo)片段有著共同的序列，用于PCR擴(kuò)增和檢測(cè)。

樣品處理：樣品中的DNA首先被變性并且探針結(jié)合。如果樣品中存在目標(biāo)序列，探針就會(huì)與之結(jié)合。

連接反應(yīng)：連接酶被加入樣品中，它們識(shí)別并連接探針上的相鄰序列。

PCR擴(kuò)增：引導(dǎo)片段啟動(dòng)PCR擴(kuò)增反應(yīng)，放大連接的DNA序列。

分析：擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過(guò)分析，通常通過(guò)凝膠電泳或其他技術(shù)，以確定是否存在特定的DNA序列，并量化這些序列的數(shù)量。

MLPA的應(yīng)用范圍廣泛，主要包括：

基因組結(jié)構(gòu)變異的檢測(cè)：MLPA可用于檢測(cè)基因組中的拷貝數(shù)變異（CNV），這是一種導(dǎo)致遺傳疾病和癌癥等疾病的常見(jiàn)形式的基因變異。

遺傳疾病的診斷：MLPA可用于檢測(cè)單基因遺傳疾病，如囊性纖維化、地中海貧血等。

腫瘤診斷：MLPA可以幫助診斷腫瘤，并確定腫瘤細(xì)胞中的基因組變異，以指導(dǎo)治療方案。

遺傳多態(tài)性的研究：MLPA可用于研究人群中的遺傳多態(tài)性，例如檢測(cè)SNP（單核苷酸多態(tài)性）和基因座的等位基因。

總的來(lái)說(shuō)，MLPA是一種高效、正確且靈活的技術(shù)，可用于研究和診斷多種遺傳性疾病和基因組變異。

MLPA探針

MLPA探針混合物中含有針對(duì)特定基因組序列的探針。一個(gè)MLPA探針由兩部分組成:左探針oligonucleotide(LPO)和右探針oligonucleotide(RPO)。LPO和RPO包含PCR引物和DNA雜交序列。RPO中額外的"填充"序列使每個(gè)探針具有獨(dú)特的長(zhǎng)度。

樣本變性和探針雜交

先進(jìn)步是純化樣本DNA并將其變性。然后與MLPA探針oligo過(guò)夜孵育。每個(gè)探針的LPO和RPO部分會(huì)與鄰接的目標(biāo)DNA序列雜交。
 

探針連鎖

第二步是將雜交至鄰接目標(biāo)序列的探針oligo進(jìn)行連鎖。在連鎖位點(diǎn)附近不允許有任何不配對(duì)的情況,這使連鎖反應(yīng)高度特異。探針連鎖產(chǎn)物的數(shù)量反映了樣本中目標(biāo)序列的數(shù)量。

探針擴(kuò)增

第三步是使用單一通用引物對(duì)連鎖的探針進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增。只有連鎖的探針才會(huì)指數(shù)級(jí)擴(kuò)增,因此無(wú)需去除未結(jié)合和未連鎖的探針。

片段分離

第四步是使用毛細(xì)管電泳對(duì)片段進(jìn)行分離。PCR產(chǎn)物被加載到毛細(xì)管電泳儀上,按長(zhǎng)度分離。每個(gè)片段對(duì)應(yīng)一個(gè)特定的MLPA探針。

數(shù)據(jù)分析

賊后一步是使用基因解碼軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。通過(guò)將測(cè)試樣本中參考探針和目標(biāo)探針的相對(duì)峰高與已知正?？截悢?shù)的參考樣本進(jìn)行比較,來(lái)確定相對(duì)拷貝數(shù)。先進(jìn)的質(zhì)量檢查有助于識(shí)別不高效的數(shù)據(jù)。