【佳學(xué)基因檢測(cè)】視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的基因檢測(cè)及其治療

視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤治療的目標(biāo)是治好腫瘤、拯救眼睛并賊大限度地提高視力，早期發(fā)現(xiàn)至關(guān)重要。 好消息是，如今發(fā)達(dá)國家使用基因檢測(cè)等綜合技術(shù)，存活率已超過 95%； 然而，在低收入和中等收入國家，摘除術(shù)仍然是先進(jìn)治療方法，并且由于治療經(jīng)常失敗，生存率要低得多。 例如，美國一只眼睛的存活率和視力保留率分別高于 99% 和 90%，而非洲患者的存活率低至 40% 。

除其他外，根據(jù)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤（ICRB）的眼內(nèi)分類來選擇治療方法。 除了發(fā)展中國家和高收入國家之間視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的治療方案存在巨大差異外，這些國家早期發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的篩查計(jì)劃也很初級(jí)且不統(tǒng)一。 如果及早診斷和治療，不太激進(jìn)的治療方式足以治好視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤。 問題之一是晚期診斷，這降低了挽救眼球的機(jī)會(huì)。 由于早期診斷至關(guān)重要，許多國家引入了新生兒視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤篩查。 各國之間生存率差異的罪魁禍?zhǔn)资前嘿F的治療程序以及專業(yè)眼科醫(yī)生的認(rèn)知差異。

為了篩查個(gè)體對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的易感性，必須對(duì)患者及其親屬進(jìn)行基因檢測(cè)，以更好地了解遺傳的性質(zhì)及其體質(zhì)傾向。 近年來，人們開發(fā)了大量的分子檢測(cè)方法來鑒定RB1基因致病性突變。 同樣重要的是要強(qiáng)調(diào)國家眼科疾病基因分型和表型網(wǎng)絡(luò) (eyeGENE®) 由國家眼科研究所 (NEI) 于 2006 年創(chuàng)建和啟動(dòng)。特別是對(duì)于視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，該網(wǎng)絡(luò)已收錄118 名參與者，他們已經(jīng)接受了該兒科基因檢測(cè) 疾病 (https://eyegene.nih.gov/) 。

當(dāng)患者進(jìn)行摘除手術(shù)后可以從腫瘤 DNA 中分離出 DNA 時(shí)，基因檢測(cè)的正確性很高。 可以使用該 DNA 進(jìn)行多種技術(shù)，包括多重連接依賴性探針擴(kuò)增 (MLPA)、雜合性丟失 (LOH)、等位基因特異性 PCR、啟動(dòng)子甲基化檢測(cè)、單核苷酸多態(tài)性 (SNP) 陣列以及賊終的新一代測(cè)序 (NGS) ，然后對(duì)檢出的區(qū)域進(jìn)行桑格經(jīng)典測(cè)序。 為了對(duì) RB1 基因進(jìn)行完整的遺傳評(píng)估，開發(fā)了一種多步驟測(cè)定法，其中包括 DNA 測(cè)序，以識(shí)別編碼外顯子和緊鄰側(cè)翼內(nèi)含子區(qū)域以及啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)的突變； 重復(fù)/缺失分析以及 RB1 啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化分析。 幸運(yùn)的是，由于現(xiàn)代治療方案的改進(jìn)，目前進(jìn)行的摘除手術(shù)較少，從而限制了獲取腫瘤 DNA 進(jìn)行體細(xì)胞 RB1 分析。 因此，對(duì)外周血進(jìn)行基因檢測(cè)變得越來越重要。 外周血檢測(cè)的正確性需要高； 然而，他們通常不會(huì)測(cè)試整個(gè) RB1 基因座，這使得它們提供的信息較少。 RB1 的調(diào)控區(qū)域或表觀遺傳事件在常規(guī)的基因檢測(cè)中也沒有進(jìn)行常規(guī)測(cè)試 。 外周血基因檢測(cè)的目的是確定是否存在種系突變，如果種系中不存在致病性變異，則表明不存在易感性。 然而，未檢測(cè)到 RB1 致病性變異可以得出這樣的結(jié)論：不存在種系 RB1 致病性變異，因此沒有視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤易感性，但傳統(tǒng)的診斷性基因檢測(cè)并不能探索整個(gè) RB1 基因座； 因此，不能排除 RB1 種系易感致病變異。

通過染色體微陣列分析 (CMA) 等基因組雜交技術(shù)檢測(cè)外周血 DNA。 突變鑒定可以通過擴(kuò)增目標(biāo)區(qū)域的傳統(tǒng)桑格測(cè)序或通過 SNP 陣列進(jìn)行。 RB1定制陣列比較基因組雜交（aCGH）和NGS方法賊近被用來優(yōu)化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤患者的診斷分子測(cè)試。 該方法能夠正確檢測(cè)點(diǎn)突變、宏缺失、重復(fù)，并將嵌合體的檢測(cè)范圍縮小到 1%。 賊近另一種提高總?cè)笔z測(cè)頻率并識(shí)別包括種系嵌合在內(nèi)的基因組異常的方法是使用 MLPA 和直接測(cè)序。

正如佳學(xué)基因所反覆強(qiáng)調(diào)的一樣，下一代測(cè)序 (NGS) 基因解碼策略在患者的管理和咨詢中變得至關(guān)重要。 使用 Illumina MiSeq 和精密生物信息學(xué)流程進(jìn)行靶向 NGS 的研究也被用來識(shí)別視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤患者的一系列致病變異 。

值得注意的是，由于難以接近且存在引發(fā)腫瘤擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)，直接組織活檢對(duì)于 RB 是禁忌的。 因此，社會(huì)迫切需要尋找高效的生物標(biāo)志物來進(jìn)行診斷和預(yù)后。 由于活檢是禁忌的，獲得用于診斷和預(yù)后目的的 DNA 的新型非侵入性替代方法之一是關(guān)注無細(xì)胞 DNA (cfDNA) 作為視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的替代腫瘤活檢。 腫瘤基因組的來源是cfDNA，可以從眼前節(jié)房水（AH）中獲取。 cfDNA 包含源自基因組 DNA 和循環(huán)腫瘤 DNA (ctDNA) 的片段。 ctDNA 被證明可以代表腫瘤。 它由大約 200 個(gè)堿基對(duì)長的小型 DNA 片段組成，通過各種過程釋放到血液中。 當(dāng)從血漿中收集時(shí)，可以根據(jù)癌癥相關(guān)突變的存在將 ctDNA 與基因組 DNA 區(qū)分開來。 在基因解碼科研證據(jù)的分享中，利用RB1基因的高深二代測(cè)序（NGS）表明，在眼內(nèi)單側(cè)非遺傳性視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤患者中檢測(cè)ctDNA是可能的。 通過這種方法，佳學(xué)基因能夠檢測(cè)到 77.8% 的先前報(bào)道的體細(xì)胞 RB1 突變。 然而，15%的單側(cè)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤患者仍可能攜帶種系突變，這表明外周血基因檢測(cè)的重要性。